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HemaTox™试剂盒已开发用于测试药物对人造血干细胞和祖细胞(HSPCs)生长和谱系特异性分化的影响。每个试剂盒均用于检测药物对特定祖细胞谱系增殖的影响,这些祖细胞来源于从脐带血(CB)或骨髓(BM)中分离的CD34+细胞。HemaTox™ 红细胞检测试剂盒, HemaTox™ 髓系试剂盒HemaTox™ 巨核细胞检测试剂盒 分别用于检测红细胞、髓细胞和巨核细胞特异性毒性。

为什么使用 HemaTox™ 试剂盒?

  • 本方法已通过与体外IC50测定现行金标准——集落形成单位(CFU)检测法的对比验证。
  • 经优化的无血清培养基及补充剂可实现高效扩增,确保实验结果一致性。
  • 测试化合物可在培养起始阶段加入以观察对祖细胞的影响,或在培养后期加入以研究对分化程度更高细胞的作用。可以使用不同的检测方法,例如流式细胞术。

HemaTox™ 系列试剂盒(用于谱系特异性毒性检测)

红系祖细胞

Erythroid Progenitor Cells

配方:

无血清

细胞类型:

人 CB 或 BM CD34+ 细胞

推荐:

红细胞祖细胞特异性毒性(贫血)试验

分析方法:

CD71、GlyA 的流式细胞染色

髓系祖细胞

Myeloid Progenitor Cells

配方:

无血清

细胞类型:

人 CB 或 BM CD34+ 细胞

推荐:

骨髓祖细胞特异性毒性(中性粒细胞减少症/白细胞减少症)检测

分析方法:

流式细胞术染色 CD13, CD14, CD15

巨核细胞

Megakaryocytes

配方:

无血清

细胞类型:

人 CB 或 BM CD34+ 细胞

推荐:

巨核细胞特异性毒性(血小板减少症)检测

分析方法:

流式细胞术染色 CD41, CD45
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数据

General HemaTox™ Kit Procedure

图1. HemaTox™试剂盒通用操作步骤

*如果使用的是已预先富集的CD34+细胞,可以省略细胞分离步骤。

Flow Cytometry Plots Showing Cells Produced After Culture of CD34+ HSPCs with HemaTox™ Erythroid, Myeloid and Megakaryocyte Kits

图2. 流式细胞术图显示CD34+造血干细胞使用HemaTox™红系、髓系和巨核细胞试剂盒培养后产生的细胞

(A)人 CB CD34+ 用 (B) HemaTox™ 红系、(C) 髓系和 (D) 巨核细胞试剂盒按照上述方案培养后的细胞。完成既定培养周期后,分别收集细胞并进行表面蛋白标记:红系(CD71与GlyA)、髓系(CD13与CD15)或巨核系(CD45与CD41)特异性表达蛋白的染色

Correlation Between IC50 Values for Six Drugs Measured Using the CFU-GM Assay and the 96-Well Plate Liquid Culture-Based HemaTox™ Myeloid Kit

图3. CFU-GM 集落形成实验与 HemaTox™髓系试剂盒在96孔板液体培养体系检测六种药物 IC50 值的相关性分析

采用MethoCult™培养基进行粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)实验,同时使用HemaTox™髓系试剂盒进行液体培养,对人骨髓 CD34+ 细胞进行培养。将两种方法测得的 IC50 值分别绘制于X轴与Y轴,结果显示其具有高度相关性(决定系数R²=0.91)。

Lineage-Specific Differences in Hematotoxicity Identified with HemaTox™ Erythroid, Myeloid and Megakaryocyte Kits

图4. 用 HemaTox™ 红系、髓系和巨核细胞试剂盒鉴定血液毒性的谱系特异性差异

结果显示:使用HemaTox™红系(灰色)、髓系(金色)和巨核系(橙色)试剂盒对人骨髓CD34+细胞进行药物测试获得的平均IC50值。多数药物对各细胞谱系毒性相似,但舒尼替尼(Sunitinib)等药物对红系祖细胞分化的毒性约为巨核系祖细胞的100倍,对髓系祖细胞分化的毒性介于两者之间。垂直线表示均值标准误差(SEM)(n=4-8)。


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