图1. 相比于测试的其他商业培养基，含CC100细胞因子混合物的StemSpan™ SFEM II无血清扩增培养基可更好地支持人CD34+细胞的扩增

将纯化的CB来源的CD34⁺细胞在StemSpan™ SFEM、SFEM II和AOF培养基以及其他公司的6种商业培养基（浅灰色柱；随机顺序，6种商业培养基包括StemLine II（Sigma）、HPGM（Lonza）、HP01（Macopharma）、SCGM（Cellgenix）、StemPro34（Life Technologies）和X-Vivo-15（Lonza））中培养7天。所有培养基均添加有StemSpan™ CC100细胞因子混合物（产品号 #02697）。竖线表示95%的置信区间。结果显示，除StemSpan™-AOF培养基，在 StemSpan™ SFEM II中产生的细胞数量细胞明显高于其他培养基中产生的细胞数量。（*P<0.05，配对t检验，n=6）。

注：所示的StemSpan™–AOF数据是使用原始的含酚红版本的StemSpan™– ACF（产品号 #09855）生成的。然而，内部测试表明，新的不含酚红、cGMP生产的StemSpan™–AOF（产品号 #100-0130）性能相当。

图2. 相比于测试的其他商业培养基，StemSpan™ 培养基可更好地支持人CD34⁺细胞和CD34^bright细胞的扩增

将纯化的CB来源⁺细胞在 StemSpan™ 培养基（SFEM、SFEM II、AOF和XF，橙色柱）和其他五家供应商的培养基（商业化培养基，灰色柱）中培养7天。所有培养基均添加了 StemSpan™ CD34⁺扩增添加物 和UM171*^{如图1 所示，}通过流式细胞术分析培养物中CD34⁺和CD34^bright活细胞的（A）比例及（B）细胞扩增情况。与其他测试的商业化培养基相比，在 StemSpan™ 培养基中培养的 CD34⁺ 和 CD34^bright 细胞的扩增显著较高（ StemSpan™SFEM、SFEM II 和 XF 与其他五家商业化培养基相比时，P<0.05，采用单因素方差分析和Dunnett事后检验计算）。CD34^bright细胞群富含功能性干/祖细胞（见图4）数据以平均值 ± SEM表示（n=8）。

*当使用终浓度为1μM的UM729（产品号 #72332）时，预计会得到类似的结果。 有关更多信息，包括比较UM171和UM729的数据，请参阅Fares et al., 2014。

注：所示的 StemSpan™–AOF 数据是使用原始的含酚红版本的 StemSpan™–ACF（产品号 #09855）生成的。然而，内部测试表明，新的不含酚红、cGMP生产的StemSpan™–AOF（产品号 #100-0130）性能相当。

图3. 通过流式细胞术分析在StemSpan™ SFEM II培养基中培养7天的动员的外周血CD34⁺细胞

将纯化的G-CSF动员外周血（mPB）来源的 CD34⁺ 细胞，在添加了StemSpan™ CD34⁺扩增添加物（产品号 #02691）和UM729（产品号 #72332）的StemSpan™SFEM II培养基（产品号 100-0130）中培养7天。 7天后，细胞经CD34、CD45RA、CD90、EPCR和CD133荧光标记抗体以及活力染料 Zombie Yellow™ 染色，并用流式细胞仪进行分析。CD34与FSC散点图（左）中的水平虚线表示CD34标志物表达的荧光减一（FMO）对照。通过连续设门（橙色）确定图2、3、4中显示的活CD34^bright活细胞、CD34^bright CD90⁺CD45RA⁻ 活细胞及 CD34^brightCD45RA⁻CD90⁺CD133⁺EPCR⁺ 活细胞的百分比。

图4. 相比于测试的其他商业培养基，StemSpan™ 培养基支持动员外周血来源的HSPCs达到同等或更高的扩增水平

将G-CSF动员外周血（mPB）来源的纯化CD34+细胞以10000细胞/mL的浓度分别接种于StemSpan™培养基（SFEM、SFEM II、AOF和XF，橙色柱）和其他六种商业化培养基（灰色柱）。所有培养基均添加StemSpan™ CD34⁺ 扩增添加物和UM729（1uM）。培养7天后，如图1所示，通过流式细胞术分析CD34^bright、CD34^brightCD45RA⁻CD90⁺ 及 CD34^brightCD45RA⁻CD90⁺CD133⁺EPCR⁺活细胞的（A）比例与（B）扩增倍数。扩增倍数已根据 StemSpan™ SFEM 为基准进行标准化（柱上方数字表示接种 CD34+ 细胞的平均产量 ± SEM)。与测试的其他商业化培养基相比，StemSpan™ 培养基支持 CD34^bright 细胞、CD34^brightCD45RA⁻CD90⁺ 细胞及 CD34^brightCD45RA⁻CD90⁺CD133⁺EPCR⁺ 细胞（后续各亚群的功能性干/祖细胞含量逐步增加）相当或更高的扩增水平。数据以平均值 ± SEM 显示，n =5。

图5. 通过有限稀释移植试验评估在StemSpan™-AOF或StemSpan™ SFEM II中扩增的脐带血CD34⁺细胞长期SCID重建细胞能力

扩增7天后，将10、100、250及2500个初始CD34⁺细胞的子代细胞静脉注射至亚致死剂量照射的NSG小鼠体内。对于未培养CD34⁺细胞，分别移植250、500和2500个细胞。移植后约20周检测小鼠骨髓中表达泛白细胞标志CD45的人源细胞比例。并以 >0.1% CD45⁺ 细胞作为判定小鼠是否成功移植的阈值。使用 Walter and Eliza Hall医学研究所的 ELDA软件进行极限稀释分析。长期造血干细胞（LT-HSC）比例（红线）及95%置信区间（方框）以“1/初始CD34⁺细胞数（相当于第0天）”表示；n=2次独立实验，每次实验每组2-7只小鼠。显著性水平*P<0.001（卡方检验）。与新鲜CD34⁺细胞相比，StemSpan™ SFEM II和StemSpan™-AOF扩增的细胞分别使LT-HSC增加约36倍和17倍，其SCID重建细胞（SRC）比例分别为1/23、1/48和1/835（对应StemSpan™ SFEM II、StemSpan™-AOF及新鲜对照组）。

图6. 相比于测试的其他培养基，含红系细胞扩增添加物的 StemSpan™ SFEM II 无血清扩增培养基支持更好的红系细胞扩增

在含有StemSpan™红系细胞扩增添加物（产品号 #02692）的 StemSpan™ SFEM（黑色柱）、SFEM II（灰色柱）和 StemSpan™–ACF红系细胞扩增培养基（ACF–E，橙色柱-）中培养纯化的脐带血 CD34+ 细胞（n = 5），14 天后统计产生的红系细胞平均数量。图示为每接种一个 CD34⁺ 细胞生成的表达CD71和/或血型糖蛋白A（GlyA）的红系细胞数量。(B) 图中显示了上述培养体系中生成的不同红系细胞亚群比例，包括CD71⁺GlyA⁺幼红细胞、未成熟的CD71⁺GlyA^-红系祖细胞与原幼红细胞，以及CD71^-/lowGlyA⁺晚幼红细胞。三种培养基均支持每孔接种的脐带血 CD34⁺细胞生成数千个红系细胞。

图7. 与测试的其他培养基相比，含巨核细胞扩增添加物的 StemSpan™ SFEM II 无血清扩增培养基支持更好的巨核细胞扩增

将纯化的脐带血CD34⁺细胞在StemSpan™ SFEM（深灰色柱）、SFEM II（金色柱）、AOF（橙色柱）以及其他6种商业化培养基（浅灰色柱；按随机顺序包括：StemLine II (Sigma)、HPGM (Lonza)、HP01 (Macopharma)、SCGM (Cellgenix)、StemPro34 (Life Technologies) 和X-Vivo-15 (Lonza)）中培养14天后获得巨核细胞，以StemSpan™ SFEM培养基中的值为基准进行标准化。所有培养基均添加了StemSpan™巨核细胞扩增添加物（产品号 #02696）。竖线表示95%置信区间。StemSpan™系列培养基生成的细胞数量显著高于其他培养基（*P<0.01，配对t检验，n=6）。

注：所示的StemSpan™–AOF数据是使用原始的含酚红版本的 StemSpan™–ACF（产品号 #09855）生成的。然而，内部测试表明，新的不含酚红、cGMP生产的StemSpan™–AOF（产品号 #100-0130）性能相当。

表1. 人脐血CD34⁺细胞在含髓系扩增添加物或髓系扩增添加物 II 的 SFEM II 培养基中生成髓系细胞

结果显示在含有髓系扩增添加物（n=14）或髓系扩增添加物II（n=16）的SFEM II培养基中培养14天后，每接种一个人脐带血CD34⁺细胞产生的总有核细胞（TNCs）数量，以及髓系标志物CD13、CD14和CD15阳性细胞的百分比。*95%置信区间（CL）；代表95%结果通常落入的范围。