使用MethoCult™培养基时，提供适宜的培养条件是确保集落形成单位（CFU）达到最佳生长状态的关键。培养皿须在 37°C、5% CO₂ 以及 ≥95% 湿度的恒温培养箱中进行孵育。建议使用水套式培养箱，在培养箱内放置水盘，并定期监测温度和CO₂水平。

维持培养体系所需的湿度水平，对于细胞集落能够理想生长至关重要。若环境中缺乏足够的湿度，CFU 将无法正常发育，进而导致最终的集落计数结果偏低。 这一湿度屏障对于红系集落的发育尤为关键。

脱水的培养体系外观上通常比平时更薄；而在显微镜下观察时，培养基往往会呈现出明显的斑点状或裂纹。

当使用 STEMvision™ 进行集落成像与计数时，维持最佳湿度环境显得尤为关键。脱水除了会导致集落生长不良外，还会破坏培养基表面的平整度，导致 STEMvision™ 采集到的成像在孔板一侧出现边缘发黑或渐变阴影，这将严重干扰系统对集落的自动识别与精准计数。

为防止脱水，当使用 35 mm 培养皿（产品号 #27100/27150） 或 SmartDish™ 6 孔板培养皿（产品号 #27370/27371） 进行 CFU 分析时，请务必严格遵照以下操作执行。

35 mm培养皿：

• 在每个 35 mm 培养皿中分别接种 1.1 mL MethoCult™ 培养基与细胞的混合液。随后，将两个接种好的 35 mm 培养皿平放入一个 100 mm 组织培养处理的培养皿（产品号 #100-0082）中，并盖上盖子。
• 在另一个不加盖的 35 mm 培养皿中加入约 3 - 4 mL 无菌水，同样平放入 100 mm 培养皿内，作为敞口水皿以维持内部湿度。
• 或者，您也可以将 35 mm 培养皿平放入 245mm x 245mm 的方形培养皿（产品号 #38039/100-0084）或其他规格合适且配有宽松外盖的培养容器内。 外皿内必须均匀放置足量的敞口水皿（例如：245 x 245mm 方皿内须配置 4 只水皿），且所有 35 mm 培养皿应围绕水皿等距排列。

SmartDish™6孔板：

• 在每个孔中接种 1.1 mL MethoCult™ 培养基与细胞的混合液，并使其均匀覆盖整个孔底表面。随后，向 SmartDish™ 6 孔板的孔间缝隙（槽线处）注入共 4 mL 无菌水（每处缝隙各注入 2 mL，具体摆放和注水区域如下方蓝色图示）

• 将SmartDish™ 6 孔板平放入更大的容器托盘中，例如 245mm x 245mm 的方形培养皿（产品号 #38039/100-0084）。
• 建议在 SmartDish™ 6 孔板的四周，放置至少额外 4 个不加盖的 35 mm 培养皿，且每只皿中均须装有 3 - 4 mL 无菌水。

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