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用于检测和计数分泌人颗粒酶B的细胞
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用于检测和计数分泌人颗粒酶B的细胞
用于检测和计数分泌人颗粒酶B的细胞
人颗粒酶B(Granzyme B)ELISpot试剂盒用于对外周血单个核细胞(PBMCs)悬液中分泌人颗粒酶B的细胞进行定量检测和计数。ELISpot常用于评估特异性免疫反应,如确定对抗原刺激产生反应的活化T细胞亚群的占比。颗粒酶B是一种由活化的CD8+细胞毒性T细胞及自然杀伤细胞分泌的丝氨酸蛋白酶,参与机体对病毒感染细胞和肿瘤细胞的免疫反应。ELISpot具有高灵敏度,可在单细胞水平检测分泌的分析物。该检测用于传染病、肿瘤、过敏和自身免疫性疾病研究。
本检测基于改良的夹心ELISA方法,将细胞加入预包被有该细胞因子特异捕获抗体的ELISpot板中。细胞因子在整个培养期间被捕获,并通过加入生物素化检测试剂抗体检测,随后加入链霉亲和素-碱性磷酸酶(SA-ALP)与生物素化抗体结合。加入显色酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-1-磷酸(BCIP)/硝基蓝四唑(NBT)后形成有色斑点。这些斑点的数量、大小和强度与样品中细胞因子分泌细胞的百分比及分泌的分析物量成正比。
Figure 1. Human Granzyme B ELISpot Kit Detects Antigen-Specific Granzyme B-Secreting T Cells Following Peptide Stimulation.
ELISpot analysis of human peripheral blood mononuclear cells cultured in the absence of stimuli (negative control) or presence of CEFTA, CEF and CMV peptide pools. Cells were seeded at 2.5 x 10^5 cells/well on Human Granzyme B pre-coated white plate and incubated at 37°C, 5% CO2 for 48 hours. Following incubation, ELISpot plates were processed as per the instructions on the Product Information Sheet. Wells were imaged and counted using an ELISpot reader.
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