方案一：使用普通离心管进行密度梯度离心

实验材料

• 全血样本（采集后需添加抗凝剂）
• RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物（产品号 #15624）
• 含有2%胎牛血清（FBS）的磷酸盐溶液（PBS）（产品号 #07905）
• Lymphoprep™（产品号 #18060）
• 离心管

实验方案

实验开始之前：请确保全血样本、PBS + 2% FBS、Lymphoprep™以及离心机均为室温（15 - 25ºC）。

1. 每1 mL全血加入50 µL RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物，室温下孵育20分钟。
2. 加入等体积的PBS + 2% FBS稀释全血，轻轻混匀。
3. 将稀释后的样本加到Lymphoprep™液面上。请注意，尽量避免密度梯度离心液与样本混合。
4. 室温下，以 1200 x g 离心20分钟（关闭刹车）。
5. 从Lymphoprep™和血浆之间的界面收集富集的细胞。
6. 使用PBS + 2% FBS清洗富集的细胞。
7. 重复清洗步骤。

方案二：使用SepMate™离心管进行密度梯度离心

实验材料

• 全血样本（采集后需添加抗凝剂）
• RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物（产品号 #15624）
• 含有2%胎牛血清（FBS）的磷酸盐溶液（PBS）（产品号 #07905）
• Lymphoprep™（产品号 #18060）
• SepMate™-15（产品号 #85415）或SepMate™-50（产品号 #85450）

实验方案

实验开始之前：请确保全血样本、PBS + 2% FBS、Lymphoprep™以及离心机均为室温（15 - 25ºC）。

1. 每1 mL全血加入50 µL RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物，室温下孵育10分钟。
2. 加入等体积的PBS + 2% FBS稀释全血，轻轻混匀。
3. 将Lymphoprep™分离液穿过SepMate™离心管的中央圆孔，加至插件下方。
4. 沿着SepMate™离心管的管壁，将稀释的样本加入。
5. 室温下，以 1200 x g，离心20分钟（开启刹车）。
6. 将含有富集单个核细胞的上层液体倾倒至新的离心管中。切勿将SepMate™离心管倒置超过2秒。
7. 使用PBS + 2% FBS清洗富集的细胞。
8. 重复清洗步骤。