PSC 细胞团块的冻存与复苏建议

• 推荐使用 CryoStor® CS10 或 mFreSR™（仅适用于在 mTeSR™1/mTeSR™ Plus 中培养的 PSC）作为多能干细胞冻存培养基。
• 您可以通过以下方式优化冻存方案，从而获得更大的细胞团块（> 150 µm）：
  • 使用 2 mL 的移液管进行操作。
  • 若使用 温和细胞解离试剂（GCDR），请将孵育时间缩短至约 1 - 2 分钟，并尽量减少刮取操作。
  • 若使用 ReLeSR™，请将孵育时间缩短至约 1 - 2 分钟。
• 复苏时，在接种前对较大的团进行轻柔吹打，使其分散为约 50 µm 的细胞团块。
• 若复苏后仅有极少数未分化克隆存活，传代时建议单独挑取这些克隆，并在新包被的同规格培养孔中集中接种（即不作拆分）。

PSC 单细胞的冻存与复苏建议

• 推荐使用 FreSR™-S 作为冻存培养基。
• 使用 ACCUTASE™ 或 GCDR 将细胞消化解离为单细胞。
• 按照1 x 10⁶ 个细胞/冻存管的密度进行分装，并采用程序降温法进行冻存。
• 为保证最佳细胞活率与回收效果，复苏接种时请在铺板培养基中添加 CloneR™2。

PSC 冻存与复苏通用技巧

冻存

• 在开始细胞消化解离之前，需提前预冷冻存培养基。
• 建议在细胞达到常规传代密度时进行收获冻存。通常按 1 支冻存管对应 6 孔板中单孔细胞量的比例进行分装（具体可根据实际培养密度灵活调整）。
• 冻存密度建议为每管 1 x 10⁶ 个细胞。
• 建议将 hPSC 作为细胞团块进行传代，因为长期连续的单细胞传代会增加核型异常的风险。如果下游应用必须或更倾向于使用单细胞传代，推荐使用 eTeSR™ 培养基，以提高细胞系的遗传稳定性。

复苏

• 将冻存管快速置于 37°C 水浴中摇动解冻，或使用 ThawSTAR® CFT2 全自动细胞解冻系统，以确保样品的无菌、复苏表现一致。在打开瓶盖/管盖之前，务必使用 70% 的乙醇或异丙醇擦拭其外壁。
• 当管内只剩下一小块冰核时，使用 2 mL 移液管将细胞悬液转移至干净的离心管中。向细胞中逐滴加入 PSC 维持培养基，以防止渗透压冲击，从而提高细胞活率。
• 复苏时的培养体系应与冻存前保持一致，维持培养一代后，再决定是否转入 mTeSR™1/mTeSR™ Plus 或 TeSR™-E8™ 培养体系。
• 接种时，通常将 1 管细胞铺到已包被的 6 孔板中的1-2 个孔（具体取决于冻存的是细胞团还是单细胞）。
• 复苏后的第一次传代时间可能会比预期更早。此时细胞往往非常密，甚至可能发生融合。经过一次传代并调整到合适的接种密度后，细胞形态即可恢复正常。

何时使用 ROCK 抑制剂（Y-27632）

对于单细胞

• 复苏后，需使用添加了 ROCK 抑制剂的培养基孵育 24 小时。

对于细胞团块

• 复苏后，也可使用添加了 ROCK 抑制剂的培养基孵育 24 小时。但我们不推荐这样做：因为这会使细胞贴壁率过高（导致接种密度过大），从而迫使细胞提前传代，甚至可能引发细胞生长过度或其他异常问题。
• 虽然加入 ROCK 抑制剂有助于 hESC/iPSC 的细胞团块的贴壁，但这一操作非必要。

用于 PSC 培养、冻存和复苏的 STEMCELL 产品

不知道如何为实验挑选最合适的培养基和试剂？我们随时为您提供支持。欢迎通过电话、邮件或直接点击本页面的在线聊天LiveChat与我们联系，共同探讨您的具体需求和应用场景。