小鼠脾脏机械解离步骤

实验步骤

1. 将脾脏组织转移到35 mm无菌培养皿中。后续如需进行细胞分选，在培养皿中加入5 mL推荐培养基（请参阅试剂盒产品说明书）。如解离组织后不需细胞分选，请在培养皿中加入含1 mM EDTA的PBS。
   1. 注意: 如同时处理多个脾脏样本，需使用100 mm培养皿，并加入10 mL培养基。
2. 去除脾脏组织上的结缔组织或脂肪，注意坏死区域，并检查脾脏是否有肿大、变色或病变。记录起始样本的状态对于后期评估细胞非常重要。
3. 从3 cc无菌注射器中取出活塞/柱塞。使用扁平的末端部分以温和画圆的方式研磨脾脏5次。这样可以破坏脾脏和髓质，释放脾细胞。
4. 将一个70 μm细胞过滤器置于50 mL无菌锥形管上，并用2 mL推荐培养基润洗滤网。
   1. 注意：细胞可能会黏附于干燥的滤网上，润洗滤网可以减少这种情况 。
5. 使用润洗过的5 mL或10 mL移液管将脾细胞吹打均匀。
6. 将上清液和组织从培养皿转移至润洗过的70μm细胞过滤器。使用一个新的3 cc无菌注射器的活塞/柱塞，以温和画圆的方式使细胞和组织通过滤网。用3 mL推荐培养基冲洗滤网。
   1. 如需提高回收率，可选择进行此步骤：
   1. 只将上清液而不要将脾脏组织移入过滤器。在培养皿中另加入5 mL推荐培养基。
   • 注意：如果一次处理多个脾脏可加入10 mL推荐培养基。
   2. 重复步骤4-6，在培养皿中加入推荐培养基（5 mL或10 mL）直至脾脏组织变白且培养基呈现澄清状态。
7. 使用3 mL推荐培养基再次冲洗滤网。
8. 离心300 x g，10分钟来收集细胞。
9. 小心弃去上清。
10. 轻轻敲击试管重悬细胞。
11. 如有需要，可在试管中加入40 mL推荐培养基，进行第二次洗涤。重复步骤8-10。
12. 脾细胞可用于下游应用。

如您对上述组织解离步骤有任何问题，请随时通过techsupport.cn@stemcell.com联系我们。