ImmunoCult™

用于T细胞疗法开发和生产的GMP T细胞扩增培养基和激活剂

T细胞疗法是癌症患者快速发展的治疗选择，然而，许多疗法由于安全性、有效性或监管障碍等问题，在临床试验中失败。这些挑战使得细胞疗法制造商难以进入商业化阶段，导致许多患者无法负担昂贵的疗法。通过使用符合现行药品生产质量管理规范 (cGMP) 的产品，科学家可以避免代价高昂的监管延误。此外，通过考虑完整的工作流程并选择已优化且高度兼容的产品，细胞疗法制造商可以简化其工艺开发，节省时间并降低成本。

使用符合 GMP 标准的 ImmunoCult™-XF 和符合 GMP 标准的 ImmunoCult™ 人源 T 细胞激活剂 CD3/CD28/CD2 和 CD3/CD28 ，实现稳定一致的 T 细胞扩增和活化。这些试剂已针对 T 细胞疗法的开发和生产进行了优化，无需使用磁珠、饲养细胞或抗原即可实现优异的 T 细胞生长和活力。ImmunoCult™ T 细胞工作流程简化了 T 细胞疗法的开发流程，实现了从发现到临床及商业化生产的标准化和规模化生产。

ImmunoCult™-XF 和 ImmunoCult™ 激活剂专为细胞和基因治疗生产中的辅助材料而设计，符合 USP 1043 和 ISO 20399 指南，并按照相关的 cGMP 法规生产。我们提供完整的质量和可追溯性文档，以支持细胞治疗开发商的风险评估和监管备案，包括原产地证书和分析证书。ImmunoCult™ 产品线的美国 FDA 主文件正在申请中，预计将于 2024 年提交。

在此页面上，您将找到支持您的 T 细胞疗法开发的工具和资源、我们对一些常见问题的解答，以及您可以注册尝试 GMP ImmunoCult™-XF 和 ImmunoCult™ T 细胞激活剂的表格。

为什么使用 ImmunoCult™ 进行 T 细胞治疗研究？生成高产量的活性和功能性T细胞——查看数据立即试用 ImmunoCult™-XF 和 ImmunoCult™ 激活剂常见问题

为什么使用 ImmunoCult™ 进行 T 细胞疗法制造？

稳健。使用符合相关 cGMP 标准的培养基，扩增用于细胞疗法开发的 T 细胞
可重复。在无血清和无异源物的培养条件下扩增T细胞，降低差异性
高效。实现高活力、稳定的T细胞扩增
功能性。获得能够在再次刺激后产生细胞因子的T细胞
精简流程。将 ImmunoCult™-XF 培养基与 ImmunoCult™ 人 T 细胞激活剂相结合，无需磁珠即可激活 T 细胞，从临床前开发到商业化生产

生成高产量的活性和功能性T细胞——查看数据

选择 GMP ImmunoCult™-XF 和 GMP ImmunoCult™ T 细胞激活剂的高性能组合，助力您的细胞疗法研发。请参阅以下每种激活剂的数据：

Data showing fold expansion, viability, and CD25 expression of T cells activated and expanded with cGMP-Manufactured ImmunoCult™

图1. 培养T细胞并使其激活和扩增的方案

使用EasySep™人T细胞分选试剂盒（产品号 #17951）从健康供体的新鲜白细胞单采术样本（产品号 #70500）中分选T细胞，并用CryoStor® CS10（产品号 #07930）进行冻存。第0天，将T细胞解冻、洗涤并重悬于添加有180 IU/mL重组人IL-2, ACF（rhIL-2；产品号 #78145）的ImmunoCult™-XF（产品号 #100-0956）中，调整细胞浓度为1 x 10⁶细胞/mL。将细胞接种到24孔组织培养板中（1 mL/孔），并使用 25 µL/mL ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂（产品号 #100-0785）*进行激活。在第3、5、7和10天，根据 (B) 中概述的低或高细胞密度，将细胞重新接种于新鲜的ImmunoCult™-XF + rhIL-2中。在第12天收集细胞。

*我们也使用ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂（产品号 #100-0784）进行了类似的实验方案。请联系我们的技术支持团队以获取更多信息。

图2. ImmunoCult™试剂在低细胞密度培养条件下实现T细胞的高效扩增

按照图1中描述的低细胞密度方案，使用ImmunoCult™-XF、重组人IL-2, ACF，和ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂对T细胞培养12天。在不同时间点收集细胞并进行分析。使用NucleoCounter® NC-250™全自动细胞分析仪评估细胞数量和活率，并通过流式细胞术分析细胞表面标志物表达。 (A) 图中的点和柱分别代表每个评估培养时间点的T细胞活率和平均累积扩增倍数。在低细胞密度培养中，第12天实现了92.8 ± 1.8%的平均活率和1497 ± 143的总扩增倍数。数据表示为平均值 ± 标准差（n = 11）。 (B) 在测试的11个供体中，10个供体第0天和第12天CD4+T细胞与CD8+ T细胞的比值（CD4:CD8）相近。 (C) 表达PD-1、TIM-3和LAG-3的T细胞比例在激活后增加，随后下降至基础水平（n = 4）。 (D) 展示了12天培养期间CD4+和CD8+细胞群中T细胞亚型的比例和数量。细胞数量基于10⁶个起始T细胞计算。中央记忆T细胞的数量从第7天到第12天保持不变。T细胞亚型包括：naive和T记忆干细胞（TN/SCM）CCR7+CD45RO-；中央记忆（TCM）CCR7+CD45RO+；效应记忆（TEM）CCR7-CD45RO+；效应细胞（TEFF）CCR7-CD45RO- (n = 4 - 11)。

ImmunoCult™ Reagents Support T Cell Activation and Expansion Following High Cell Density Protocol

图3. ImmunoCult™试剂支持高细胞密度方案下的T细胞激活和扩增

使用ImmunoCult™-XF、重组人IL-2, ACF，和ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂，按照图1中描述的高细胞密度方案对T细胞培养12天。在不同的时间点收集并分析细胞。使用NucleoCounter® NC-250™全自动细胞分析仪评估细胞数量和活率，并通过流式细胞术分析细胞表面标志物表达。(A) 图中的点和柱分别代表每个评估培养时间点的T细胞活率和平均累积扩增倍数。在这些高密度培养的细胞中，在第12天实现了89.3 ± 2.3%的平均活率和67 ± 7的总扩增倍数（平均值 ± 标准差，n = 4）。(B) 在培养开始和结束时检测了CD4+ T细胞与CD8+ T细胞的比值（CD4:CD8）。在测试的4个供体中，有2个供体的CD4:CD8比值有所增加。(C) 除CD8⁺细胞群体中的LAG-3表达外，表达PD-1、TIM-3和LAG-3的T细胞比例在激活后增加，随后在培养第12天下降至基础水平（n = 4）。(D) 数据显示了在所示时间点CD4+和CD8+细胞群中T细胞亚型的比例和数量。细胞数量基于10⁶个起始T细胞计算。中央记忆T细胞的数量在培养的第7天到第12天持续增加。T细胞亚型包括：naive和T记忆干细胞（TN/SCM）CCR7+CD45RO-；中央记忆（TCM）CCR7+CD45RO+；效应记忆（TEM）CCR7-CD45RO+；效应细胞（TEFF）CCR7-CD45RO- (n = 4)。

Bioreactor-Based Expansion with ImmunoCult™ Reagents Yields High Numbers of Viable, Functional T Cells

图4. 使用ImmunoCult™试剂和生物反应器扩增可获得大量高活率的功能性T细胞

(A) Xuri™ Cell Expansion System W25中的T细胞扩增流程：使用EasySep™人T细胞分选试剂盒从新鲜白细胞单采术样本中分离T细胞，并用CryoStor® CS10进行冻存。第0天，复苏冻存的细胞，并将其重悬于添加有180 IU/mL重组人IL-2, ACF的ImmunoCult™-XF中，细胞浓度为1 x 10⁶个细胞/mL。将5 x 10⁷个T细胞接种到T175组织培养瓶中，并使用25 μL/mL的ImmunoCult™人 CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂进行激活。第3天，通过添加新鲜的ImmunoCult™-XF（含IL-2）将细胞密度调整为1 - 2.5 x 10⁵个细胞/mL。第5天，将含有3 x 10⁸个细胞/L培养体积的细胞悬液接种到Xuri™ 2L Cellbag™生物反应器中，并培养至第10天。一旦细胞密度达到1.5 x 10⁶个细胞/mL，于第7天开始进行灌注，灌注速率为0.5 L/天，并在第9天增加至1 L/天。在第10天收集细胞。(B) 图中的点和柱分别代表每个评估培养时间点的T细胞活率和平均累积扩增倍数。平均而言，在第10天实现了92.7 ± 0.7%的活率和503 ± 51的总扩增倍数（平均值 ± 标准差，n=4）。(C) 在培养开始和结束时检测CD4+ T细胞与CD8+ T细胞的比值（CD4:CD8）变化。观察到供体之间存在一定差异（n = 4）。(D) 表达PD-1、TIM-3和LAG-3的T细胞比例在第3天增加，随后从第3天到第10天下降（n = 4）。(E) 显示了在CD4+和CD8+细胞群中T细胞亚型的比例和数量。细胞数量基于10⁶个起始T细胞计算。中央记忆T细胞的数量在培养的第7天达到峰值。T细胞亚型包括：naive和T记忆干细胞（ TN/SCM）CCR7+CD45RO-；中央记忆（TCM）CCR7+CD45RO+；效应记忆（TEM）CCR7-CD45RO+；效应细胞（TEFF）CCR7-CD45RO- (n = 4)。(F) 经PMA和离子霉素刺激后，扩增的T细胞中表达IFN-ɣ和TNF-ɑ的比例在CD4+细胞群中分别为66.6 ± 2.1%和96.3 ± 1.1%，在CD8⁺细胞群中分别为73.2 ± 11.4%和93.8 ± 1.3%。此外，未经刺激的扩增CD8+ T细胞中表达穿孔素和颗粒酶B的比例分别为23.3 ± 9.1%和37.7 ± 6.8%（n = 4）。

High-Efficiency TRAC Knockout of T Cells

图5. 高效基因敲除T细胞的TRAC

(A) T细胞的非病毒基因编辑和扩增方案：第0天，使用EasySep™人T细胞分选试剂盒从新鲜白细胞单采术样本中分离T细胞。将细胞重悬于添加有180 IU/mL重组人IL-2, ACF（rhIL-2）的ImmunoCult™-XF中，调整细胞浓度为1 x 10⁶个细胞/mL。将细胞接种到24孔组织培养板中（1 mL/孔），并使用25 μL/mL的 ImmunoCult™人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂进行激活。激活3天后，通过电转染（Neon® Transfection System）将含有ArciTect™ Cas9核酸酶（产品号 #76004）和靶向TRAC基因的sgRNA RNP复合物递送至T细胞。随后，将细胞放回添加有rhIL-2的ImmunoCult™-XF培养基中，按照低细胞密度方案再扩增9天。(B) T细胞基因编辑后第2天和第9天，TCRαβ和CD3表达的代表性流式细胞术图。(C) 通过检测基因编辑2天后模拟处理组（91.8 ± 1.1%）和编辑组T细胞（16.1 ± 2.6%）中剩余的TCRαβ+CD3+细胞的比例来评估基因编辑效率。TRAC编辑细胞的比例在整个培养过程中得以维持。(D) 在整个培养周期中，使用NucleoCounter® NC-250™全自动细胞分析仪检测T细胞的活率。在第3天，T细胞的活率在转染后立即进一步降低。(E) 电转染后模拟处理组和TRAC编辑T细胞的累计细胞扩增倍数相近，表明编辑后的T细胞具有功能性。数据表示为平均值 ± 标准差（n = 3）。