样本使用HetaSep™去除红细胞后如何计算用于集落检测的细胞铺板浓度

4 步骤 4 实验材料打印

如使用少量新鲜血液作为集落检测的样本，需在进行铺板之前，通过沉降法去除样本中的红细胞（RBC）。去除红细胞的样本可随后用于集落（CFU）检测，以评估造血干/祖细胞的增殖和分化能力。此实验步骤描述了在使用HetaSep™去除血液样本中的红细胞后如何计算细胞浓度，以及如何确定达到集落检测所需接种密度的样本体积。

所需材料

亚甲基蓝的3％乙酸（产品号 #07060）
HetaSep™（产品号 #07806）
含2%胎牛血清的Dulbecco磷酸盐缓冲液（产品号 #07905）
Iscove's MDM with 2% FBS（产品号 #07700）

实验步骤

请参考下面的用于计算的符号定义：

[ Sample ] = 样本中的细胞浓度（i.e. 细胞数/mL)
C = 细胞浓度
V = 体积

使用含亚甲基蓝的3％乙酸计算有核细胞总数，得到起始样本中的细胞浓度。如需更多信息，可参考此实验步骤：如何使用细胞计数板进行细胞计数。
稀释后总体积除以起始样本体积得到稀释倍数：

例如：如果您按照HetaSep™处理小体积样本的实验步骤操作，在血液样本中加入150µL含2%胎牛血清（FBS）的磷酸缓冲液（PBS）和40 µL HetaSep™。这个例子中，稀释倍数按下面的方法计算：
通过起始样本细胞浓度除以稀释倍数得到样本使用HetaSep™去除红细胞后的有核细胞浓度（[Sample_RBC-cleared]）：

例如：如果起始样本为5.0 x 10⁶细胞/mL，稀释倍数为4.8，那使用HetaSep™去除红细胞后的样本浓度为：
您现在可以制备样本，用于在MethoCult™培养基中进行集落检测。按照集落检测的标准步骤，制备所需接种密度的10倍浓度样本，以在MethoCult™培养基中稀释。使用去除红细胞的样本，通过下面的公式计算：

例如：如果所需的样本铺板密度为每个35mm培养板1 x 10⁴个细胞，您需要准备10倍浓度（1 x 10⁵细胞/mL）：

因此，您需要将96 µL去除红细胞的样本加入到904 µL 含有2%FBS的IMDM培养基里面，以制备成10倍浓度的用于集落检测的样本。