EasySep™小鼠TIL（CD45）正选试剂盒
GloCell™ 可固定活性染料
通过排除死细胞来提高流式细胞术数据的准确性
GloCell™ 可固定活性染料（GloCell™ Fixable Viability Dyes）是一种荧光胺标记染料，用于区分活/死哺乳动物细胞，可在流式细胞术数据中清晰排除死细胞干扰。该染料还支持通过荧光显微镜观察活细胞与死细胞的视觉差异，并兼容细胞内抗体染色实验流程。
为什么在流式细胞术中排除死细胞很重要？
在细胞凋亡早期阶段，非活性细胞开始丧失结构完整性并逐渐增加通透性。流式细胞实验中，抗体会穿过受损的细胞膜非特异性结合死细胞，导致假阳性结果并降低数据质量。死细胞的自发荧光强度也显著高于活细胞，这会干扰稀有细胞群或弱阳性标志物的检测。虽然通过设门可粗略区分活/死细胞群，但仅依靠散射光分析难以完全排除所有死细胞。使用活/死细胞染色染料能有效缓解这些问题。
GloCell™ 染料是如何工作的？
GloCell™ 固定活性染料是活细胞/死细胞染色染料，不可逆地结合细胞表面和细胞内胺基。对于活细胞，GloCell™ 染料不能穿过完整的细胞膜，只能标记细胞表面少量胺基。相反，死细胞受损的细胞膜允许 GloCell™ 染料接触到更多的细胞内胺基，从而产生比活细胞更高的荧光。荧光强度的差异使用户能够清楚地区分活细胞和死细胞群，确保流式细胞术结果的可靠性。
图1所示. 活/死细胞染色用GloCell™固定式活性染料
(A)在死细胞中，GloCell™染料与细胞表面和细胞内胺基结合。(B)在活细胞中，GloCell™染料仅与细胞表面胺基结合。(C)活的和死的外周血单个核细胞用 GloCell™固定活力染料紫510 (目录# 75010)。
为什么使用可固定活性染料？
用可固定活性染料标记的细胞即使在固定、渗透和洗涤后也能保持荧光强度。这使得样品在固定后，仍可轻松鉴别和评估活细胞与死细胞。
图2. 用GloCell™可固定活性染料染色的非固定和固定细胞中荧光信号的保存
将WLS-1C人诱导多能干细胞（iPS）的活细胞和死细胞（在95°C热休克30分钟）混合后，使用 GloCell™固定活力染料紫450 （目录#75009）在4%多聚甲醛固定或未固定的条件下染色。染色后立即进行流式细胞术分析(A)未固定细胞和(B)固定细胞。
为什么使用 GloCell™ 染料？
- 灵活。适用于广泛的激发和发射波长范围。可用于荧光显微镜，流式细胞术，和细胞内抗体染色方案。
- 稳定。耐受固定、透化和洗涤处理。
- 兼容。经验证，可与我们的EasySep™和RosetteSep™细胞分选产品一起使用。
